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详细信息

【病毒平台】稳转株筛选(病毒)

 实验原理

在基因功能的研究中,基因是否有效转染靶细胞,是功能研究的前提条件之一。瞬时感染用时少,但得到蛋白量相对少,不能满足蛋白的大量生产,而且外源基因不能在宿主细胞中长期稳定表达。而稳定表达细胞株则弥补了瞬时感染一些功能实验中由于外源基因表达时间短的缺陷,便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白间相互作用。
1. 稳转细胞系
稳定感染就是慢病毒携带的外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时感染基础上对靶细胞进行筛选,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代,从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。最常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。
2. 稳定细胞系筛选方法
(1)转染质粒后,单克隆方法筛选稳定细胞系;
(2)慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。
实验流程

 

稳转株筛选.png

 

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目的基因稳定株、对照稳定株以及实验报告。

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