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详细信息

【动物平台】基因敲除动物定制

 

基因敲除动物定制

 

转基因小鼠制备

由客户提供转基因质粒图谱、质粒DNA及其相关序列信息,中心负责质粒鉴定、酶切线性化DNA制备、小鼠受精卵显微注射、注射受精卵移植、移植小鼠孕期观察饲养、新生小鼠出生记录及生命维持、编号及鼠尾基因组DNA抽提、转基因阳性小鼠的PCR鉴定等。

技术指标:显微注射用受精卵采自C57BL/6J(♀)与CBA(♂)的F1代;胚胎移植(受精卵输卵管移植)受体采用ICR代假孕母鼠;受精卵供体、受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境;获得转基因质粒六个月内提供3只以上鼠龄4-6周的转基因阳性小鼠(杂合子Founder),雌雄不限。

全基因敲除小鼠模型制备

根据客户的需求进行打靶载体构建,由客户提供目标基因的Ensembl序列号,并提出拟剔除区域;中心科研人员设计打靶策略,并反馈客户,经客户确认后进行打靶载体的构建及后续研发。中心承诺提供3只以上阳性小鼠。

技术指标:显微注射用受精卵采自C57BL/6J(♀)与CBA(♂)的F1代;胚胎移植(受精卵输卵管移植)受体采用ICR代假孕母鼠;受精卵供体、受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境;阳性小鼠需通过测序证实待敲基因的序列。

条件性基因敲除或敲入小鼠模型制备

根据客户的需求进行打靶载体构建,由客户提供目标基因的Ensembl序列号,并提出拟剔除(或敲入)区域;中心科研人员根据客户的需求确定flox或敲入片段插入的区域,经认可后中心科研人员设计打靶策略,并反馈客户,经客户确认后进行打靶载体的构建及后续研发。中心承诺提供3只以上阳性小鼠。

技术指标:显微注射用受精卵采自C57BL/6J(♀)与CBA(♂)的F1代;胚胎移植(受精卵输卵管移植)受体采用ICR代假孕母鼠;受精卵供体、受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境。对于基因敲入、flox小鼠各阶段均需通过测序证实敲入基因的存在和序列正确。

模型小鼠胚胎冻存保种

由客户提供转基因或基因敲除雄鼠,中心负责将该小鼠与超排的C57BL/6J交配,取桑椹胚阶段的胚胎,并采用玻璃化冷冻的方法进行胚胎冻存,保存在液氮中。

客户提供5-10只6-8周龄雄鼠(转基因阳性鼠或基因敲除杂合子/纯合子雄鼠),并提供基因修饰鼠基因型鉴定的引物及条件;中心负责小鼠基因型复检(PCR方法),将超排后的4-6周龄C57BL/6J雌鼠与基因修饰雄鼠交配,取桑椹胚阶段的胚胎,每个品系冻存200枚桑椹胚阶段的胚胎。

冻存小鼠胚胎复苏繁殖

冷冻保存的胚胎由客户运至中心(液氮中运输),中心按照客户提供的冻存及复苏方法,复苏胚胎,并将胚胎移植到假孕母鼠体内(输卵管移植或子宫移植),仔鼠出生记录及基因型鉴定等。

技术指标:胚胎复苏并将胚胎移植到假孕母鼠ICR的子宫(每侧移植6枚囊胚)内,受体鼠及新生鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境中。中心保存的胚胎复苏后,提供5只以上SPF级转基因阳性鼠或基因剔除杂合子小鼠,雌雄不限;客户提供的冷冻胚胎复苏移植后,所有出生的仔鼠均提供给客户。

小鼠胚胎注射(包括原核胚注射和囊胚注射)

由客户提供待注射物品,中心负责小鼠胚胎的显微注射、胚胎的移植、移植小鼠孕期观察饲养、嵌合体小鼠出生记录、生命维持等。

技术指标:显微注射用胚胎取自C57BL/6J或ICR(由客户选择);胚胎移植(受精卵子宫内移植)受体采用ICR代假孕母鼠;胚胎供体、受体及新生仔鼠均维持在SPF级小鼠饲养环境。

小鼠胚胎操作及品系建立

本中心还可进行小鼠卵子、精子和胚胎的采集、冻存和复苏;并可进行体外受精、显微受精、克隆、胚胎生物净化、小鼠嵌合胚胎的制备和四倍体胚胎拯救等技术服务。收费标准视具体情况而定。

 

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