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详细信息

【分子平台】RT-PCR检测

 实验原理

RT-PCR即逆转录pcr,其原理是提取组织或细胞中的总RNA,利用Oligo(dt)或随机引物反转录,获得cDNA模板,进一步通过PCR反应获得目的基因产物或检测其表达水平。与其他技术相比,RT-PCR技术更加灵敏易于操作,在细胞/组织基因表达水平的半定量检测,特定基因cDNA克隆及RNA病毒检测等分子生物学领域得到广泛应用。


实验流程
 

qPCR检测.png

  

 

 

荧光定量PCR.png


样本保存处理及运输方式
 

pcr样本形式1.png

   

实验结果展示
        

pcr -溶解曲线.jpg
1496390366604995.jpg

                                                                                                                                                                                

 

注意事项:

1.在30min内完成组织操作,并立即放入-80℃或液氮中保存。
2.有条件的话,最好先将样本在液氮中速冻,再转入-80℃冰箱中保存。
3.使用的冻存管最好也用DEPC处理。
4.对于组织及细胞样本,如果没有液氮或-80℃冰箱,也可用RNAlater保存,但是组织一定要切成比较小的块状,-20℃保存运输。
5.少量指标,组织需要提供的样本量要求50mg或更多;细胞样本需要提供六孔板一个孔的细胞量或更多。

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