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你所熟知的elisa知识小汇总--质控标准

     1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附测定( elisa)用于IgG定量测定的文章,使得该技术发展成液体标本中微量物质的常用测定方法。本文将带你一一熟知elisa技术的核心质控标准。

 
    elisa的基础是抗原抗体反应,在检测时,样本中的抗原或者抗体与固相载体表面的抗原或者抗体反应形成复合物,再用酶标的抗原或者抗体进行显色系统反应,当底物被催化显色后可直接相关联待检测标本中的物质含量。按照原理及操作一般可将elisa分为四类:直接elisa,间接elisa,双抗夹心elisa,竞争抑制elisa。其他elisa都是隶属于这四类或者组合衍生。
 
    下面我们将对每一类进行细解。
 
    直接elisa
 
    直接elisa是最简单的一种,其方法是抗原按照一定浓度包被在固相载体上,洗涤孵育后,只需加入一种特异性的酶标抗体,再经过底物显色反应即可判读结果。此方法可常用于单抗亚型和血清种属等检测。但由于直接法只经过了一步信号放大,其灵敏度有限,所以它的应用范围也是有限的。
 
    间接elisa
 
    间接elisa的过程中加入了一种非酶标抗体,与固相载体的抗原结合,再用酶标二抗特异性结合,最后加入底物显色。此方法由于信号经过了两步方法,提高了检测灵敏度。另外所有相同种属的一抗均可以同用一种酶标二抗,这样科研工作者就无需进行一抗标记了,大大的缩减了工作量,是目前常用的方法手段。
 
 
    双抗夹心elisa
 
    可分为双抗原夹心法和双抗体夹心法,其原理都是一样的。比如双抗体夹心法,捕获抗体包被在固相载体上,加入抗原结合,再次加入的检测抗体结合在抗原上,一起形成“sandwich”夹心。此方法的检测对象必须是多价抗原,包含两个或者两个以上的表位,一般为大分子蛋白。对于各种天然的免疫蛋白类分子大多都是采用这种检测方法。
 
    竞争抑制elisa
 
    其主要原理是用待检抗原或抗体去干扰已经预先设计好的体系,最终显色的结果与待检抗原或抗体的干扰程度成负相关。这种方法多是应用于小分子抗原或者半抗原,只要有一个结合部位即可。

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