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详细信息

PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书

 PicoGreenDNA荧光定量测定试剂盒品说明书

 

主要用途

 

 PicoGreenDNA荧光定量测定试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,高度敏感。

 

技术背景

 

作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地样品中双链DNA结合,产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧光单位(RFU)的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation)低,不受样品化学成分的干扰。

 

产品内容

 

染色液Reagent A       62.5微升

稀释液(Reagent B       15 毫升

标准液(Reagent C            1

产品说明书                 1份

 

保存方式

 

保存染色液Reagent A)和标准液(Reagent C在-20℃冰箱里,其余的保存在4冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照有效保证6

 

用户自备

 

1.5毫升离心管:用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板:用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析

 

实验步骤

 

一、 测定准备

 

1. 准备好待测样品,置于冰槽里

2. 设定好荧光分光光度仪(温度为37℃):激发波长480nm,散发波长530nm,并置零 

3. 实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent A置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀释液(Reagent B到新的15毫升离心管,加入25微升染色液(Reagent A,混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液,放在暗室里。然后进行下列操作。

 

二、 构建标准曲线

 

1. 准备好51.5毫升离心管,标记为15号管

2. 分别加入500微升稀释液(Reagent B到每个离心管

3. 移取500微升标准液(Reagent C1号管,混匀

4. 小心移取500微升1号管稀释的标准液(Reagent C2号管,混匀

5. 小心移取500微升2号管稀释的标准液(Reagent C3号管,混匀

6. 小心移取500微升3号管稀释的标准液(Reagent C4号管,混匀

7. 15号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表

 

管号

缓冲液(Reagent B

标准液(Reagent C

标准DNA总量

1

500微升

500微升

1微克

2

500微升

500微升1号管

0.5

3

500微升

500微升2号管

0.25

4

500微升

500微升3号管

0.125

5

500微升

空对照

0

 

8. 移取500微升含有染色液(Reagent A稀释液(Reagent B染色工作液新的比色皿

9. 加入500微升上述配制的标准液

10. 室温下,孵育5分钟,避免光照

11. 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence UnitRFU

12. 重复实验步骤811四次

13. 绘制标准曲线:纵座标(Y轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X轴)为DNA含量(微克)

 

三、 样品检测

 

1. 移取500微升含有染色液(Reagent A稀释液(Reagent B染色工作液新的比色皿

2. 加入500微升待测样品

3. 室温下,孵育5分钟,避免光照

4. 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence UnitRFU

5. 根据标准曲线获得样品对应DNA含量微克

6. 样品实际DNA浓度:

[根据标准曲线获得样品对应DNA含量(微克)X样品稀释倍数]0.5(样品容量;毫升)=微克/毫升

 

 

注意事项

 

1. 本产品为20次(比色皿100次(96孔板)操作,包括标准曲线测定

2. 操作时,须戴手套

3. 使用新鲜配制的染色工作液,务必不要超过2小时,且注意避光

4. 建议使用塑料管配制染色工作液,而不是玻璃制品

5. 孵育时,避免光照

6. 系统检测,标准曲线测定1次即可;如果仪更换,则需要重新测定1

7. 如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量

8. 可以使用荧光酶标仪检测,试剂用量和体系均除以5,包括标准DNA含量,其计算公式

 

[根据标准曲线获得样品对应DNA浓度(微克X样品稀释倍数0.1(样品容量;毫升)微克/毫升

 

9. 盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNARNA不会干扰检测

10. 本公司提供系列DNA检测试剂产品

 

质量标准

 

1. 本产品经鉴定性能稳定

本产品经鉴定高度敏感

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