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PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书
主要用途
PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,高度敏感。
技术背景
作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地与样品中双链DNA结合,产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧光单位(RFU)的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation)低,不受样品化学成分的干扰。
产品内容
染色液(Reagent A) 62.5微升
稀释液(Reagent B) 15 毫升
标准液(Reagent C) 1毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存染色液(Reagent A)和标准液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照,有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管:用于工作液配制的容器
比色皿或96孔板:用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析
实验步骤
一、 测定准备
1. 准备好待测样品,置于冰槽里
2. 设定好荧光分光光度仪(温度为37℃):激发波长480nm,散发波长530nm,并置零
3. 实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀释液(Reagent B)到新的15毫升离心管,加入25微升染色液(Reagent A),混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液,放在暗室里。然后进行下列操作。
二、 构建标准曲线
1. 准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管
2. 分别加入500微升稀释液(Reagent B)到每个离心管
3. 移取500微升标准液(Reagent C)到1号管,混匀
4. 小心移取500微升1号管稀释的标准液(Reagent C)到2号管,混匀
5. 小心移取500微升2号管稀释的标准液(Reagent C)到3号管,混匀
6. 小心移取500微升3号管稀释的标准液(Reagent C)到4号管,混匀
7. 将1至5号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表
管号 |
缓冲液(Reagent B) |
标准液(Reagent C) |
标准DNA总量 |
1 |
500微升 |
500微升 |
1微克 |
2 |
500微升 |
500微升1号管 |
0.5微克 |
3 |
500微升 |
500微升2号管 |
0.25微克 |
4 |
500微升 |
500微升3号管 |
0.125微克 |
5 |
500微升 |
空对照 |
0 |
8. 移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液到新的比色皿
9. 加入500微升上述配制的标准液
10. 室温下,孵育5分钟,避免光照
11. 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
12. 重复实验步骤8至11四次
13. 绘制标准曲线:纵座标(Y轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X轴)为DNA含量(微克)
三、 样品检测
1. 移取500微升含有染色液(Reagent A)和稀释液(Reagent B)的染色工作液到新的比色皿
2. 加入500微升待测样品
3. 室温下,孵育5分钟,避免光照
4. 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
5. 根据标准曲线获得样品对应DNA含量(微克)
6. 样品实际DNA浓度:
[根据标准曲线获得样品对应DNA含量(微克)X样品稀释倍数]0.5(样品容量;毫升)=微克/毫升
注意事项
1. 本产品为20次(比色皿)和100次(96孔板)操作,包括标准曲线测定
2. 操作时,须戴手套
3. 使用新鲜配制的染色工作液,务必不要超过2小时,且注意避光
4. 建议使用塑料管配制染色工作液,而不是玻璃制品
5. 孵育时,避免光照
6. 系统检测,标准曲线测定1次即可;如果仪器更换,则需要重新测定1次
7. 如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量
8. 可以使用荧光酶标仪检测,试剂用量和体系均除以5,包括标准DNA含量,其计算公式:
[根据标准曲线获得样品对应DNA浓度(微克)X样品稀释倍数]÷0.1(样品容量;毫升)=微克/毫升
9. 盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNA和RNA不会干扰检测
10. 本公司提供系列DNA检测试剂产品
质量标准
1. 本产品经鉴定性能稳定
本产品经鉴定高度敏感