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PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书

 PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书

主要用途

 PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来精确定量样品中DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。

技术背景

作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地与样品中双链DNA结合，产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度（Intensity）或相对荧光单位（RFU）的显著增加。其自发荧光（Autofluorescence）忽略不计，重复性标准差异（Standard Deviation）低，不受样品化学成分的干扰。

产品内容

染色液（Reagent A）       62.5微升

稀释液（Reagent B）       15 毫升

标准液（Reagent C）            1毫升

产品说明书                 1份

保存方式

保存染色液（Reagent A）和标准液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器

比色皿或96孔板：用于荧光分析的容器

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

实验步骤

一、 测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里

2． 设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长480nm，散发波长530nm，并置零 

3． 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀释液（Reagent B）到新的15毫升离心管，加入25微升染色液（Reagent A），混匀后，用锡纸包裹，标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

二、 构建标准曲线

1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

2． 分别加入500微升稀释液（Reagent B）到每个离心管

3． 移取500微升标准液（Reagent C）到1号管，混匀

4． 小心移取500微升1号管稀释的标准液（Reagent C）到2号管，混匀

5． 小心移取500微升2号管稀释的标准液（Reagent C）到3号管，混匀

6． 小心移取500微升3号管稀释的标准液（Reagent C）到4号管，混匀

7． 将1至5号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表

8． 移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿

9． 加入500微升上述配制的标准液

10． 室温下，孵育5分钟，避免光照

11． 即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

12． 重复实验步骤8至11四次

13． 绘制标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X轴）为DNA含量（微克）

三、 样品检测

1． 移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿

2． 加入500微升待测样品

3． 室温下，孵育5分钟，避免光照

4． 即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）

5． 根据标准曲线获得样品对应DNA含量（微克）

6． 样品实际DNA浓度：

[根据标准曲线获得样品对应DNA含量（微克）X样品稀释倍数]0.5（样品容量；毫升）=微克/毫升

注意事项

1． 本产品为20次（比色皿）和100次（96孔板）操作，包括标准曲线测定

2． 操作时，须戴手套

3． 使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过2小时，且注意避光

4． 建议使用塑料管配制染色工作液，而不是玻璃制品

5． 孵育时，避免光照

6． 系统检测，标准曲线测定1次即可；如果仪器更换，则需要重新测定1次

7． 如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量

8． 可以使用荧光酶标仪检测，试剂用量和体系均除以5，包括标准DNA含量，其计算公式：

[根据标准曲线获得样品对应DNA浓度（微克）X样品稀释倍数]÷0.1（样品容量；毫升）＝微克/毫升

9． 盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNA和RNA不会干扰检测

10． 本公司提供系列DNA检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

本产品经鉴定高度敏感